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大鼠elisa檢測試劑盒中一般有兩次抗原抗體反響,即加標本和加酶結合物后??乖贵w反響的完結需求有一定的溫度和時(shí)刻,這一保溫進(jìn)程稱(chēng)為溫育,有人稱(chēng)之為孵育,在大鼠elisa檢測試劑盒中似不恰當。
1、為什么ELISA反響總是需求一定時(shí)刻的溫育?
ELISA屬固相免疫測定,抗原、抗體的結合只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例,加入板孔中的標本,其間的抗原并不是都有平等的和固相抗結合的時(shí)機,只有*貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個(gè)逐步平衡的進(jìn)程,因而需經(jīng)擴散才能到達反響的結尾。在這以后加入的酶標記抗體與固相抗原的結合也同樣如此。
2、溫育常選用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃等。
37℃是實(shí)驗室中常用的保溫溫度,也是大多數抗原抗體結合的適宜溫度。在建立ELISA方法作反響動(dòng)力學(xué)研究時(shí),實(shí)驗表明,兩次抗原抗體反響一般在37℃經(jīng)1~2小時(shí),產(chǎn)品的生成可達高峰。為加快反響,可進(jìn)步反響的溫度,有些實(shí)驗在43℃進(jìn)行,但不宜選用更高的溫度??乖贵w反響4℃更為穩定,在放射免疫測定中多使反響在冰箱中過(guò)夜,以構成最多的沉淀。但因所需時(shí)刻太長(cháng),在大鼠elisa檢測試劑盒中一般不予選用。
大鼠elisa檢測試劑盒保溫的方式除有的ELISA儀器附有特制的電熱塊外,一般均選用水浴,可將大鼠elisa檢測試劑盒板置于水浴箱中,ELISA板底應貼著(zhù)水面,使溫度敏捷平衡。為防止蒸騰,板上應加蓋,也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔,此時(shí)可讓反響板漂浮在水面上。若用保溫箱,大鼠elisa檢測試劑盒應放在濕盒內,濕盒要選用傳熱性良好的資料如金屬等,在盒底墊濕的紗布,后將ELISA板放在濕紗布上。濕盒應先放在保溫箱中預溫至規則的溫度,特別是在氣溫較低的時(shí)候更應如此。